JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準規范》將于4月27日正式實(shí)施。在抗擊疫情中，生物安全柜作為疫情檢測人員和科研人員安全防護屏障的最基本防護設備，性能可靠與否對使用人員安全起著(zhù)至關(guān)重要的作用。為讓從事相關(guān)工作的計量人員更好的理解該規范，《中國計量》雜志社邀請JJF1815-2020的主要起草人，對JJF1815-2020進(jìn)行了解讀。
一、規范制定的必要性和意義
2003年以來(lái)，隨著(zhù)重癥急性呼吸綜合征（SARS）病毒、高致病性禽流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒、新型冠狀病毒等新發(fā)傳染病的不斷出現，我國一直都在加強對醫院、疾控部門(mén)、科研單位和高等院校等單位生物防護的監管，并把生物安全納入國家安全體系。因此，生物安全柜作為疫情檢測人員和科研人員安全防護屏障的最基本防護設備，在醫療衛生、疾病預防與控制、食品衛生、生物制藥、環(huán)境監測以及各類(lèi)生物實(shí)驗室等領(lǐng)域的應用一直保持快速增長(cháng)。
2013年國務(wù)院頒布的《計量發(fā)展規劃（2013-2020年）》明確將生物安全領(lǐng)域的計量溯源作為重點(diǎn)工作，生物安全柜作為生物安全領(lǐng)域重要的保障設備，其計量校準工作則顯得尤為重要。生物安全柜是一種基于高效過(guò)濾和氣流動(dòng)力原理的負壓過(guò)濾排風(fēng)設備，它的主要作用是在保護樣本不被外界污染的同時(shí)，能夠更好地保護檢測人員不被操作的病原微生物所感染。因此，生物安全柜的性能可靠與否，不僅關(guān)系著(zhù)實(shí)驗的成敗，而且也關(guān)系著(zhù)實(shí)驗操作人員和醫護人員的安危。
目前，我國市場(chǎng)上的生物安全柜品牌和規格型號眾多，因此如何對生物安全柜進(jìn)行計量校準，以確保其參數數據準確和性能可靠顯得十分迫切與必要。JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準規范》在此背景下制定，于2020年1月17日批準，自2020年4月17日實(shí)施。
二、主要內容及重點(diǎn)解讀
1.結構
JJF1815-2020依據JJF1071-2010《國家計量校準規范編寫(xiě)規則》的要求進(jìn)行編寫(xiě)，共分范圍 、引用文件、術(shù)語(yǔ)和計量單位、概述、計量特性、校準條件、校準項目和校準方法、校準結果表達、復校時(shí)間間隔及附錄共10部分，其中附錄中包括碘化鉀法、校準原始記錄格式、校準證書(shū)（內頁(yè)）格式和Ⅱ級生物安全柜校準結果的測量結果不確定度評定示例等內容。
2.適用范圍
JJF1815-2020適用于Ⅱ級生物安全柜的校準，Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜相同原理部分的校準可以參照本規范執行。
3.起草原則與內容
（1）術(shù)語(yǔ)和計量單位
生物媒介 、生物危害、下降氣流流速、下降氣流流速柵格、單向氣流、流入氣流、非均勻下降氣流、均勻下降氣流、生物安全柜標稱(chēng)寬度、生物安全等級、流速標稱(chēng)值、傘形罩排氣連接、直接排氣連接、高效過(guò)濾器、多分散氣溶膠、工作區、工作臺、前窗引用于NSF/ANSI49-2018《生物安全柜 設計、結構、性能和現場(chǎng)認證（Biosafety Cabinetry: Design, Construction, Performance, and Field Certification）》中的定義；交叉污染、產(chǎn)品保護、生物安全柜、保護因子引用了BS EN12469-2000《生物技術(shù) 微生物安全柜的性能標準（Biotechnology—Performance criteria for microbiological safety cabinets）》中的定義，前窗操作口高度引用了YY0569-2011《Ⅱ級生物安全柜》的定義。
（2）概述
概述中主要介紹了生物安全柜的應用、分類(lèi)，并對Ⅱ級生物安全柜的分型及其特點(diǎn)作了著(zhù)重介紹，其中對Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜的描述有助于理解Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜與Ⅱ生物安全柜哪部分原理相同，當Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜作為被校準對象時(shí)可以參照本規范執行。之外，相比以往發(fā)布的生物安全柜標準中對Ⅱ級的分型，本規范新增Ⅱ-C1生物安全柜（NSF/ANSI49-2018新增類(lèi)型，國內已有公司開(kāi)始銷(xiāo)售此型號），它兼具了A型和B型II級生物安全柜的特點(diǎn)。
（3）計量特性的確定
通過(guò)對生產(chǎn)廠(chǎng)家和用戶(hù)的調研，確定了下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度、噪聲、高效/超高效過(guò)濾器檢漏等在生物安全柜使用過(guò)程中對安全和工作舒適性影響較大的指標作為計量特性指標。此外，氣流模式、人員保護、產(chǎn)品保護和交叉污染保護對生物安全柜的防護性能評價(jià)至關(guān)重要，其技術(shù)要求在校準方法中予以規定，但沒(méi)有作為計量特性體現。計量特性的具體指標根據 WS233-2017《病原微生物實(shí)驗室生物安全通用準則》、YY0569-2011、BS EN12469-2000、NSF/ANSI49-2018、ISO14644-1:2015《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1部分：依據粒子濃度對空氣潔凈度分級（Cleanrooms and associated controlled environments Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration）》、BS5726-3:1992《微生物安全柜規范 第3部分:安裝后性能規范（Microbiological safety cabinets Part 3: Specification for performance after installation）》、Clark R P, Goff M R. The Potassium Iodide Method for Determining Protection Factors in Open-fronted Microbiological Safety Cabinets[J]. Journal of Applied Bacteriology, 1981, 51(3):439、畢建軍, 溫占波, 趙建軍,等. 用粘質(zhì)沙雷菌試驗評價(jià)Ⅱ級生物安全柜的研究[J]. 中國消毒學(xué)雜志, 2007, 24(1):4-8等標準和文獻確定。相比于BS EN12469-2000和NSF/ANSI49-2018兩個(gè)國際標準，本規范有一個(gè)特色是增加了潔凈度指標，這主要是因為WS233-2017中對生物安全設備的現場(chǎng)隔離檢查規定生物安全柜的潔凈度是必須檢測的指標。同時(shí)，相比YY0569-2011更多關(guān)注儀器注冊檢驗、型式評價(jià)或者產(chǎn)品設計的指標，本規范則主要考慮到校準現場(chǎng)的實(shí)際情況，重點(diǎn)參考了NSF/ANSI49-2018對現場(chǎng)測試指標的設定，如平均背景照度不大于160lx時(shí)，生物安全柜平均照度應不小于650lx，每個(gè)照度實(shí)測值應不小于430lx；實(shí)際噪聲應不大于70dB。
（4）校準條件
本部分主要規定了生物安全柜校準時(shí)需要滿(mǎn)足的環(huán)境條件，以及使用的校準用材料及設備，包括Ⅱ級鋼卷尺、風(fēng)量計、風(fēng)速儀、煙霧發(fā)生裝置、塵埃粒子計數器、照度計、聲級計、高效過(guò)濾器檢漏儀、高效過(guò)濾器計數檢漏儀、智能生物安全柜生物檢測儀（微生物法）、生物安全柜質(zhì)量檢測儀（碘化鉀法）、微生物定量標準物質(zhì)、Φ90培養皿和多分散氣溶膠，明確了標準器及配套設備的測量范圍和準確度等信息要求。相比以往的生物安全柜標準，本規范針對標準器及配套設備配置的指導性更清晰明確。
（5）校準方法
本部分主要針對生物安全柜的外觀(guān)、下降氣流流速、流入氣流流速、氣流模式、潔凈度、照度、噪聲、高效/超高效過(guò)濾器檢漏、人員保護、產(chǎn)品保護和交叉污染保護等指標的具體校準方法進(jìn)行了具體說(shuō)明和示意圖展示，同時(shí)對下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度和噪聲進(jìn)行了數學(xué)公式化處理，有助于后續校準數據的分析處理。其中流入氣流流速測試用風(fēng)量計法或風(fēng)速儀法，優(yōu)先采用風(fēng)量計法；高效/超高效過(guò)濾器檢漏測試用光度法或計數法；人員、產(chǎn)品和交叉污染保護測試用微生物法或碘化鉀法，仲裁時(shí)用微生物法。碘化鉀法具有快速高效，且方便的特點(diǎn)，彌補了微生物法的周期慢，測試麻煩，生物制備價(jià)格高的缺點(diǎn)，是目前世界上普遍被認可的先進(jìn)方法。相比于YY0569-2011等國內生物安全柜標準僅在人員保護測試中采用碘化鉀法，本規范還在產(chǎn)品和交叉污染保護測試中增加了碘化鉀法。
（6）復校時(shí)間間隔
針對生物安全柜的檢測周期，國內外標準條例中都分別給出了相應規定。我國發(fā)布的GB19489-2008《實(shí)驗室生物安全通用要求》，要求將生物安全柜作為一種必不可少的保護實(shí)驗室工作人員的主要安全防護設備，在安裝或維修后應按照經(jīng)確認的方法進(jìn)行現場(chǎng)檢測，并且須按不大于12個(gè)月的周期進(jìn)行管理評審每年開(kāi)展驗證，同時(shí)要求實(shí)驗室操作人員具備規范化、標準化使用生物安全柜的能力。國家衛健委頒布的WS233-2017中規定，用于規范各級微生物和生物醫學(xué)實(shí)驗室的生物安全防護，要求生物安全隔離設備等需進(jìn)行一年一度的常規檢測。CNAS-AL02：2018《醫學(xué)實(shí)驗室質(zhì)量和能力認可申請書(shū)》的附表3（CNAS-CL02-A005）的5.3.1.4條款對自查評審內容的設備校準、驗證等應符合如下要求中的（c）部分：每12個(gè)月進(jìn)行檢定或校準的設備至少應包括生物安全柜（高效過(guò)濾器、氣流、負壓等參數）等。此外，在《有害健康物質(zhì)的控制（Control of Substances Hazardous to Health Regulations, COSHH）》條例中也規定，為保證生物安全柜工作的正常狀態(tài)，至少12個(gè)月要進(jìn)行一次詳細的檢查和測試，如果使用頻率高，建議至少每6個(gè)月1次。本規范通過(guò)參考借鑒以上標準條例，給出了復校時(shí)間間隔不超過(guò)1年的建議。
（7）不確定度評定示例
附錄D給出了下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度和噪聲等五個(gè)參數的測量不確定度評定示例，其中在具體分析每個(gè)參數測量不確定度時(shí)，示例中由標準器引入的標準不確定度分量均是根據校準用標準器的最大允許誤差進(jìn)行分析，后續建標時(shí)各單位可根據各個(gè)實(shí)驗室配置的標準器溯源證書(shū)的準確度信息（如準確度等級、不確定度或最大允許誤差）確定各自實(shí)驗室由標準器引入的標準不確定度分量。
三、校準中的注意事項
1.附錄A的A.1中給出了碘化鉀法的基本原理，經(jīng)過(guò)分析推導指出，一套測試系統的實(shí)際經(jīng)驗值為：N≥3×108，s≥20 L/min，n≤4，由此確知Apf的最小值為1.5×105。在A(yíng).6中根據市場(chǎng)上常用測試系統確定的N、V、F、n值推算出的Apf技術(shù)要求為1.0×105，即相當于過(guò)濾膜上的斑點(diǎn)數為62。如果后續建標時(shí)所用測試系統的N、V、F、n值與附錄A的不一致，可根據所用測試系統的N、V、F、n值重新進(jìn)行計算得出其Apf作為技術(shù)要求。
2.生物安全柜中空氣經(jīng)過(guò)高效/超高效過(guò)濾器，垂直送風(fēng)，定量試驗下的局部漏過(guò)率不超過(guò)0.01%，以保證內循環(huán)氣體的無(wú)菌狀態(tài)，不需要額外的紫外殺菌。同時(shí)在生物安全柜使用或校準過(guò)程中需要注意保持一定的自?xún)魰r(shí)間，一般為工作前和工作后（15~30）min。
3.實(shí)驗室安裝的生物安全柜應遠離門(mén)、窗、回風(fēng)口和送風(fēng)口，以免影響生物安全柜的正常使用，如流入氣流流速、人員保護等會(huì )受生物安全柜放置位置的影響。
4.生物安全柜的核心要點(diǎn)是實(shí)現氣流平衡（氣流穩定性）：當風(fēng)機送風(fēng)量不變，HEPA/ULPA泄漏時(shí)，下降風(fēng)量變大，外排風(fēng)量減小，循環(huán)風(fēng)沒(méi)有經(jīng)過(guò)過(guò)濾，污染樣本，此時(shí)循環(huán)風(fēng)下降速度快，可能吹出生物安全柜，吹出的氣溶膠感染操作者；當風(fēng)機送風(fēng)量不變，HEPA/ULPA被堵時(shí)，下降風(fēng)量變小，外排風(fēng)量變大，窗口進(jìn)風(fēng)量增大，可能污染樣本。實(shí)際校準時(shí)，可根據校準結果參考以上原則給客戶(hù)提供調整或維修建議。
5.人員、產(chǎn)品和交叉污染保護測試的目的是確定氣溶膠是否保留在生物安全柜內、外部的污染物是否未進(jìn)入生物安全柜的工作區域，以及生物安全柜中裝置之間的氣溶膠污染是否減到最小。這個(gè)指標是集高效過(guò)濾器檢漏、潔凈度、下降氣流流速、流入氣流流速和氣流模式的綜合指標，也是生物安全柜的核心指標，建議給具體客戶(hù)提供校準項目建議時(shí)對該項目做重點(diǎn)說(shuō)明。
注：隋志偉和崔宏恩為共同第一作者，戴新華為通訊作者。
鏈接：
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本文刊發(fā)于《中國計量》雜志2020年第3期
作者：隋志偉 高運華 戴新華 中國計量科學(xué)研究院、崔宏恩 江蘇省計量科學(xué)研究院、 厲龍 蘇州市計量測試院
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